Аутоиммунные нейтропении
Дата добавления: 2010-09-06 10:34:16
Автор: adminka
Аутоиммунные нейтропении характеризуются развитием антител, реагирующих с собственными лейкоцитами. Это основное отличие их от аллоиммунных нейтропении. Иммунологическая диагностика аутоиммунных форм нейтропении существенно улучшилась за последние годы в связи с разработкой ряда новых методических приемов. К ним относится, в частности, выявление антител цитотоксического характера.
Цитотоксические антитела к полиморфноядерным лейкоцитам в настоящее время выявляют с помощью гранулоцитотоксического теста. Сенсибилизацию лейкоцитов антителами проводят при +4°С, этап инкубации с комплементом — при +20°С. Полиморфноядерные лейкоциты выделяют из крови, взятой на гепарине. После осаждения эритроцитов раствором желатины надосадочную жидкость со взвешенными в ней полиморфноядерными лейкоцитами наслаивают на двойной градиент плотности (верхний с удельной плотностью 1,080, нижний—1,120) и центрифугируют при 3000 об/мин (1000 g) в течение 30 мин. Полиморфноядерные лейкоциты в виде тонкого белого кольца располагаются на границе между легким и тяжелым градиентными растворами. Гранулоциты отсасывают и обрабатывают 0,02% раствором иодацетамида при 37°С в течение 15 мин. После этого двукратно отмывают раствором Хэнкса и используют в реакции в концентрации 3000—5000 клеток в 1 мм3. Гранулоцитотоксическую пробу выполняют на планшетах Терасаки.
Инкубацию лейкоцитов с сывороткой проводят в течение 1 ч с
комплементом в течение 1,5 ч. Комплементом служит смесь сыворотки 10 кроликов,
адсорбированная равным объемом смеси эритроцитов всех групп. Учет результатов
осуществляют по количеству мертвых клеток после прокрашивания клеток 1%
раствором трипановой сини в соответствии с 4-балльной системой: +1 (10—20%)
мертвых клеток, +2 (21—50%) мертвых клеток, +3 (51—80%) мертвых клеток, +4 (81
— 100%) мертвых клеток.
Просмотров: 958