Сенсибилизированные тромбоциты
Дата добавления: 2010-09-09 03:25:51
Автор: adminka
Сенсибилизированные тромбоциты при ультрафиолетовом освещении в люминесцентном микроскопе имеют зеленоватое точечное или краевое свечение, благодаря присоединению к имеющимся на их мембране антитромбоцитарным антителам меченых антиглобулиновых антител. Различают два варианта люминесцентного метода: прямой и непрямой.
При прямом методе троекратно отмытые в фосфатном буфере рН 7,4 тромбоциты соединяют с противочеловеческой анти IgG сывороткой, меченной изотиоционатом натрия. Меченая индикаторная сыворотка перед использованием должна быть освобождена от мелких кусочков выпавшего в осадок красителя путем центрифугирования ее при 12 000 оборотах в минуту и разведена, чтобы она не показывала неспецифического свечения с несенсибилизированными тромбоцитами. Инкубацию тромбоцитов с индикаторной антиглобулиновой противочеловеческой сывороткой проводят в течение ]/2 ч в условиях комнатной температуры при 18°С После этого из 4-кратно отмытых тромбоцитов готовят препарат на предметном стекле, фиксируют его подсушиванием, наносят каплю глицерина, накрывают предметным стеклом, запаивают по краям парафином и просматривают в люминесцентном микроскопе при ув. 90X4. Этот вариант флюоресцентного теста применяют главным образом для установления антител, уже фиксированных на тромбоцитах больного.
Обнаружение антител, циркулирующих в кровяном русле, производят с помощью непрямого люминесцентного теста. Отличие его от вышеизложенного варианта состоит в том, что объектом исследования служит сыворотка больного. Ее исследуют в отношении аллогенных тромбоцитов здоровых лиц. Непрямой люминесцентный тест применяют главным образом в тех случаях, когда тромбоцитов больного недостаточно для выполнения прямой люминесцентной пробы или с целью выявления в сыворотке аллоиммунных антител, реагирующих с тромбоцитами. Аутологичные тромбоциты используют в непрямом люминесцентном тесте с собственной сывороткой для усиления положительных результатов, которые были получены в прямой люминесцентной пробе (Н. М. Катанджан, 1984). Большое значение в целях обнаружения антител против тромбоцитов люминесцентным методом сыграло использование параформальдегида. 1% параформальдегидом обрабатывали тромбоциты с целью снятия неспецифически связывающихся с ними белков сыворотки.
Просмотров: 851