Моноклональные антитела

Дата добавления: 2010-09-11 06:18:52

Автор: adminka

За последние годы на основе моноклональных антител достигнут существенный прогресс в области получения иммунологических реактивов для идентификации аллогенных, а также дифференцировочных антигенов человека. Поэтому мы считали целесообразным привести основные сведения об этой новой искусственно получаемой категории антител.

Моноклональные антитела представляют иммуноглобулины определенной специфичности, синтезированные одним клоном плазматических клеток. Получение моноклональных антител базируется на фундаментальном положении иммунологии, что антитела одной специфичности продуцируются плазматическими клетками одного клона. Основываясь на этом положении, Кохлер и Мильстей в 1975 г. создали метод, позволяющий нарабатывать такие антитела в краткосрочной культуре. Продуцентами моноклональных антител служили клетки, представляющие гибриды лимфоцитов (иммуноцитов) мышей, сенсибилизированных определенным антигеном, и клеток перевивной мышиной миеломы. Суть технологии получения моноклональных антител сводится к удалению селезенки мышей, иммунизированных определенным антигеном. Далее эти клетки смешивают с перевивной линией мышиной миеломы и подвергают ряду манипуляций, включающих обработку полиэтиленгликолем и диметилсульфоксидом в конечной концентрации 35% и 50%. Это позволяет разрушить клеточную мембрану и осуществить слияние плазмоцитов с миеломными клетками. Полученные гибридомы обладали двумя главными качествами своих прародительских клеток: способностью синтезировать антитела и способностью к неограниченному росту в культуре ткани или в культуре in vivo. Эти два качества и определяют по существу преимущества гибридомных клеток. Далее на селективных средах, включающих гипоксантин, аминоптерин, тимидин, отделяют гибридные клетки от родительских путем 7—10-дневного культивирования. В среде, содержащей указанные компоненты, родительские клетки не растут.

Заключительным этапом получения моноклональных антител является отбор среди полученных гибридом тех, которые представляют интерес для исследования. Культуральную жидкость хорошо растущих гибридомных клеток исследуют в отношении панели клеток-мишеней, и отбирают гибридомы, продуцирующие антитела желаемой специфичности. Последующие этапы состоят в клонировании и реклонировании путем сокращения количества клеток, вводимых в культуру, до 1 многократными последовательными разведениями суспензии клеток. Наработка антител имеет место не только in vitro, в культуре ткани, но также in vivo при перевивке мышам гибридных клеток продуцентов нужных антител. Для этого гибридам F₁ вводят внутрибрюшинно 10⁷ гибридомных клеток. В этой биологической модели субстратом, содержащим моноклональные антитела, является сыворотка крови или асцитическая жидкость, которую получают от мышей через несколько дней после прививки гибридомы. Важно отметить, что количество антител в культуре ткани in vivo более чем в 1000 раз большее по сравнению с содержащимися в культуральной жидкости. Асцитическую жидкость освобождают от клеток путем центрифугирования при 12 000g. Выделение антител осуществляют гельфильтрацией. В 1980—1982 гг. Voak с помощью мышиной карциномы получили гибридные клетки, продуцирующие высокоавидные антитела IgM класса иммуноглобулинов против группового антигена А. Годом позже Sacks Lennox получили моноклональные антитела к В-групповому антигену гибридомной техникой путем иммунизации мышей В-групповой субстанцией.

Просмотров: 707