Что такое тканевое типирование
Дата добавления: 2010-08-19 02:58:03
Автор: adminka
Тканевое типирование - весьма специализированное и дорогостоящее исследование. Антигены локусов HLA-A; HLA-B; HLA-C устанавливают серологическим методом при помощи изоиммунных тестовых сывороток цитотоксического характера. Техника тканевого типирования в значительной мере унифицирована и осуществляется с помощью стандартного оснащения, включающего микрошприцы с дозаторами (диспенсерами) и планшеты, Основным методом тканевого типирования является микролимфоцитотоксическая проба. Лейкоциты, выделенные из крови градиентным центрифугированием, соединяют с тестовыми реактивами и инкубируют на столе при 18°С. В присутствии комплемента тестовые реактивы убивают лимфоциты, которые содержат соответствующие антигены. Гибель клеток оценивается по их выраженной способности поглощать 1 % раствор трипановой сини или 5% водный раствор эозина. Исследование производится на планшетках с лунками, куда закапывают взвесь лимфоцитов и тестовые сыворотки по 1 мл с помощью шприцев на 25—50 мл. Используют панель из 120—150 сывороток. При этом применяют несколько сывороток каждой специфичности (принцип батарейности).
Особенность типирования антигенов локусов HLA-DR и HLA-DP состоит в том, что его осуществляют с помощью пролонгированного варианта лимфоцитотоксического теста в отношении лимфоцитов В-популяции.
Антигены локуса HLA-D устанавливают при помощи смешанной культуры лимфоцитов MLC, основанной на совместном краткосрочном культивировании
лимфоцитов, принадлежащих двум различным фенотипам. В присутствии чужеродных
клеток, отличающихся по локусу HLA-D, культивируемые лимфоциты путем деления превращаются в
молодые бластные элементы и идентифицируются по накоплении в готовящихся к
делению клетках меченого 3Н-тимидина. Выявление лимфоцитами
детерминант осуществляется с помощью однонаправленной культуры, при которой
тестируемые лимфоциты обрабатывают митомицином С или лучами Рентгена, которые
убивают клетки, но не повреждают их HLA-D антигены, являющиеся митогенами. В качестве тестируемых
клеток используют панель лимфоцитов, полученных от лиц из семей, где родителями
являются близкие родственники (отец-дочь, двоюродный брат и сестра). Такие лица
от близкородственных браков оказываются часто гомозиготными по большинству
антигенов гистосовместимости, включая локус HLA-D и поэтому могут быть использованы в качестве стандартной
шкалы для распознавания антигенов локуса HLA-D.
Типирование аллелей HLA-DP локуса осуществляют предварительно стимулированными in vitro
(примированными) лимфоцитами так же в однонаправленной смешанной культуре
лимфоцитов, как и в отношении локуса HLA-D.
Просмотров: 887